Ulukaya, EnginSapancı, SelinBozkurt, SüreyyaAztopal, Nazlıhan2024-05-192024-05-192020https://search.trdizin.gov.tr/yayin/detay/1222365https://hdl.handle.net/20.500.12713/411015.01.2020 00:00Epigenetik değişiklikler, geleneksel tedaviye dirençten sorumlu tutulan kanser kök hücrelerin (KKH) özelliklerinin düzenlenmesinde anahtar bir role sahiptir. Bu hücrelerde, Wnt/ ß-katenin sinyalizasyonunun yeniden/aşırı aktive olduğu ve sürecin epigenetik mekanizmalar tarafından düzenlendiği bilinmektedir. Dolayısıyla, ilgili epigenetik düzenekleri hedefleyen yaklaşımlarla KKH?lerinin terapötik olarak hedeflenebildiği gösterilmiştir. Özellikle, yolağı inaktif durumda tutan ana düzenleyicilerin aktivitesinin epigenetik modifikasyonlar aracılığıyla baskılanması kötü prognoz ile ilişkilendirilmektedir. Bu nedenle, proje önerisi kapsamında, akciğer kanseri KKH?lerinde epigenetik inhibitörlerle manipülasyon sonrası Wnt/ß-katenin sinyal yolağının negatif düzenleyici bileşeni Naked (NKD1 ve NKD2) düzeylerinde değişimin araştırılması ve sürece katkı sağlayan ilgili histon modifikasyonlarının belirlenmesi amaçlanmıştır. Öncelikli olarak, parental H1299 hücre soyu (H1299/P) içindeki KKH sayısı göreceli olarak arttırıldı (propagasyon, H1299/S) ve KKH?lere karakteristik yüzey belirteci oranları akım sitometri ile gösterildi. Ardından, histon demetilaz inhibitörü /DZNep ile ön tedavi uygulanan hücreler histon deasetilaz inhibitörü/TSA ile muamele edildi ve sitotoksik etki araştırıldı. İnhibitörlerin tek başlarına toksik etki sergilemedikleri dozların (0.1-0.25 uM) kombine kullanımında güçlü sitotoksik etki saptandı. H1299/S?in agresif karakteri ile ilişkili olarak NKD2?nin gen ve protein düzeylerinde azalma olduğu ve kombinasyon uygulaması sonrası ifadesinin yeniden düzenlendiği (artış) RT-PCR ve western blotting ile gösterildi. Wnt/ ß-katenin sinyal yolağı aktivitesi, EMT süreci ve ?stemness? ilişkili değişiklikler western blotting ile araştırıldı. NKD2 ifadesinde artışın Wnt/ ß-katenin sinyal yolağının inaktivasyonu ve agresif karakterin baskılanmasına katkı sağladığı belirlendi. Kombinasyon uygulaması sonrası global histon modifikasyon profili ELISA ile değerlendirildi ve NKD2 promotor bölgelerinde ilgili histon işaretlerinin değişimi ChIP yöntemi ile araştırıldı. Transkripsiyonel baskılanma ile ilişkili histon işareti H3K9me3 düzeylerinde gözlenen azalma ile NKD2 düzeylerindeki artış arasında doğrudan bir ilişki olmadığı saptandı. Bu kombinasyon tedavisinin, KKH?leri hedeflemedeki başarısının yeni ve umut verici bir epigenetiik tedavi seçeneği olarak kullanılabileceği öngörüsüyle ileri analizlerinin yapılması gerektiği sonucuna varılmıştır.trinfo:eu-repo/semantics/openAccessProje0431222365