Kök hücre yüklü ipek fibroin-temelli nanohibrit kemik dokuiskelelerinin geliştirilmesi

Abstract

Tez çalışması kapsamında, farklı oranlarda çift katmanlı hidroksit bileşikleri (LDH) içeren bir seri jelatin-metakrilat (JelMA)/ İpek fibroin (J/IF LDH) doku iskeleleri hazırlanmış, LDH nanopartiküllerinin fiziksel, kimyasal, mekaniksel ve biyolojik özellikleri üzerine etkileri ve kemik doku mühendisliğinde kullanılabilirliği araştırılmıştır. Mg-Al LDH nanopartikülleri hidrotermal metot kullanılarak sentezlenmiş, FTIR, XRD, ICP-MS, TEM, partikül boyu ve zeta potansiyeli analizleri ile karakterize edilmiştir. Mg-Al LDH nanopartiküllerinin sitotoksisitesi Wharton jeli mezenkimal kök hücreleri (WJMKH) kullanılarak MTT testi ile belirlenmiştir. J/IF LDH doku iskeleleri, fotobaşlatıcı varlığında UV ışığı altında mikro-kalıplama tekniği ile hazırlanmıştır. Yapıları FTIR ve SEM analizi, şişme, degredasyon ve mekaniksel dayanım testleri ile karakterize edilmiştir. WJMKH hücrelerinin doku iskeleleriyle olan etkileşimlerinin incelenmesi için WJMKH hücreleri J/IF LDH doku iskelerinin üzerine ekilmiş, yapışma ve çoğalma davranışları incelenmiştir. Takiben doku iskelelerine enkapsüle edien WJMKH hücrelerinin canlılığı, çoğalma hızları ve morfolojileri Live/Dead, PrestoBlue, DAPI/Actin analizleri ile incelenmiştir. Geliştirilen doku iskelelerinin osteojenik farklılaştırma kapasiteleri; Alkalen Fosfataz, Biçinkoninik asit, Alizarin Red S, Hematoksilen & Eosin, Masson Trikrom ve immünfloresan boyamaları ve SEM analizleri ile değerlendirilmiştir. Tüm sonuçlar, geliştirilen Mg-Al LDH nanopartikül katkılı JelMA/IF temelli nanohibrit doku iskelelerinin kemik doku mühendisliği uygulamaları için yapay kemik üretiminde kullanılabileceğini göstermiştir.

Within the scope of the thesis study, a series of gelatin-methacrylate (JelMA)/ Silk fibroin (J/IF LDH) tissue scaffolds containing layered double hydroxide compounds (LDH) in different proportions were prepared, the effects of LDH nanoparticles on physical, chemical, mechanical and biological properties and their usability in bone tissue engineering were investigated. Mg-Al LDH nanoparticles were synthesized using hydrothermal method and characterized by FTIR, XRD, ICP-MS, TEM, particle size and zeta potential analyzes. Cytotoxicity of Mg-Al LDH nanoparticles was determined by MTT assay using Wharton’s jelly-derived mesenchymal stem cells (WJ-MSCs). J/IF LDH tissue scaffolds were prepared by micro-molding technique under UV light in the presence of the photoinitiator. Their structures have been characterized by FTIR and SEM analysis, swelling, degradation and mechanical strength tests. In order to examine the interaction of WJ-MSCs with tissue scaffolds, WJ-MSCs were seeded on J/IF LDH tissue scaffolds, and their adhesion and proliferation behaviors were examined. Subsequently, viability, proliferation rate and morphology of WJ-MSCs- laden tissue scaffolds were examined by Live/Dead, PrestoBlue, DAPI/Actin analyzes. Osteogenic differentiation abilities of the developed tissue scaffolds were evaluated by Alkaline Phosphatase, Bicinchoninic acid, Alizarin Red S, Hematoxylin & Eosin, Masson’s Trichrome and immunofluorescence staining and SEM analyzes. All results showed that the developed JelMA/IF- based nanohybrid tissue scaffolds containing Mg-Al LDH nanoparticles can be used in the production of artificial bone for bone tissue engineering applications.