Differentiation potential and tumorigenic risk of rat bone marrow stem cells are affected by long-term in vitro expansion
Citation
Karaöz, E., & Tepeköy, F. (2019). Differentiation Potential and Tumorigenic Risk of Rat Bone Marrow Stem Cells Are Affected By Long-Term In Vitro Expansion. Turkish Journal of Hematology, 36(4), 255.Abstract
Objective: Mesenchymal stem cells (MSCs) have the capacity for extensive expansion and adipogenic, osteogenic, chondrogenic, myogenic, and neural differentiation in vitro. The aim of our study was to determine sternness, differentiation potential, telomerase activity, and ultrastructural characteristics of long-term cultured rat bone marrow (rBM)-MSCs. Materials and Methods: rBM-MSCs from passages 3, 50, and 100 (P3, P50, and P100) were evaluated through immunocytochemistry, reverse transcription-polymerase chain reaction, telomerase activity assays, and electron microscopy. Results: A dramatic reduction in the levels of myogenic markers actin and myogenin was detected in P100. Osteogenic markers Coln, osteonectin (Sparc), and osteocalcin as well as neural marker c-Fos and chondmgenic marker Coll2 were significantly reduced in P100 compared to P3 and P50. Osteogenic marker bone morphogenic protein-2 (BMP2) and adipogenic marker peroxisome proliferator-activated receptor gamma (Ppary) expression was reduced in late passages. The expression of sternness factor Rex-1 was lower in P100, whereas Oct4 expression was decreased in P50 compared to P3 and P100. Increased telomerase activity was observed in long-term cultured cells, signifying tumorigenic risk. Electron microscopic evaluations revealed ultrastructural changes such as smaller number of organelles and increased amount of autophagic vacuoles in the cytoplasm in long-term cultured rBM-MSCs. Conclusion: This study suggests that long-term culture of rBM-MSCs leads to changes in differentiation potential and increased tumorigenic risk. Amaç: Mezenkimal kök hücreler (MKH) in vitro uzun süreli ekspansiyon,
adipojenik, osteojenik, kondrojenik, miyojenik ve nöral farklılaşma
potansiyeline sahiptir. Çalışmamızın amacı uzun süre kültüre edilen
sıçan kemik iliği (sKİ)-MKH’lerinin kök hücre niteliklerini, farklılaşma
potansiyellerini, telomeraz aktivitelerini ve ultrayapısal özelliklerini
belirlemektir.
Gereç ve Yöntemler: 3., 50. ve 100. pasajlardan (P3, P50 ve P100) elde
edilen sKİ-MKH’leri, immünohistokimya, revers-transkriptaz polimeraz
zincir reaksiyonu, telomeraz aktivite analizleri ve elektron mikroskopi
ile değerlendirilmiştir.
Bulgular: P100’de miyojenik belirteçlerden aktin ve miyogenin
seviyelerinde düşüş gözlemlenmiştir. Osteojenik belirteçler Coll1,
osteonektin (Sparc) ve osteokalsin ile nöral belirteç c-Fos ve kondrojenik
belirteç Coll2 P100’de P3 ve P50’ye kıyasla önemli ölçüde azalmıştır.
Osteojenik belirteç kemik morfojenik protein-2 (BMP2) ve adipojenik
belirteç peroksizom proliferatör ile aktive olan reseptör gamma (Pparγ)
geç pasajlarda düşüş göstermiştir. Kök hücre belirteçlerinden Rex-1’in
ekspresyonu P100’de düşüş gösterirken, Oct4 ekspresyonunun P50’de
P3 ve P100’e göre düşüş gösterdiği belirlenmiştir. Uzun süre kültüre
edilen hücrelerdeki artmış telomeraz aktivitesi tumorijenik riske işaret
etmektedir. Elektron mikroskopik değerlendirmeler, uzun süre kültüre
edilen sKİ-MKH sitoplazmasında düşük sayıda organel ve artmış
oranda otofajik vaküol gibi utrayapısal değişiklikler ortaya koymuştur.
Sonuç: Bu çalışma, sKİ-MKH’lerinin uzun süreli kültüre edilmesinin
bu hücrelerin farklılaşma potansiyelinde değişikliklere ve tümörijenik
riskin artmasına neden olduğunu göstermiştir.