İyi üretim uygulamaları standartlarında farklı tekniklerle izole edilen göbek kordonu kaynaklı erken ve geç pasaj mezenkimal kök hücrelerin immunofenotipik, genomik ve immunsüpresif özelliklerinin karşılaştırılması
Yükleniyor...
Tarih
2021
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
İstinye Üniversitesi / Sağlık Bilimleri Enstitüsü
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/openAccess
Özet
Mezenkimal Kök Hücreler (MKH'ler); kemik, kıkırdak, kas, yağ, sinir, epitel vb. hücrelere farklılaşma kapasitelerinin yanında kendini yenileme özelliğine de sahiptir. Göbek kordonu, Wharton's Jelly (WJ) olarak adlandırılan ve MKH bakımından oldukça zengin bir jelatinli bir bağ dokusu içermektedir. WJ-MKH’ler; hem otolog hem allojenik kullanımda terapötik özelliklere sahip olmaları, üç germ katmanına farklılaşma yetenekleri, immün yanıtı modüle etme özellikleri, doku onarımını teşvik etmeleri, hasarlı dokuda birikerek sitokin salınımları gibi özellikleri rejeneratif tıpta kullanımlarını öne çıkarmaktadır. İyi Üretim Uygulamaları, ürünlerin kalite standartlarına göre üretilmesini, ürünlerdeki risklerin en aza indirgenmesini ve tespit edilmesini sağlayan bir sistemdir. Bu tez çalışması kapsamında göbek kordonu, İyi Üretim Uygulamaları laboratuvarına ulaştırılmış ve izolasyon dahil hücre üretim aşamaları bu standartlarda gerçekleştirilmiştir. Bununla birlikte bu çalışma, göbek kordonundan enzimatik ve eksplant olmak üzere iki farklı yöntemle izole edilen ve farklı pasaj numaralarına (P2 ve P6) getirilen MKH’lerin fenotipik özellikleri, genomik özellikleri, immun düzenleyici özelliklerini tartışmaktadır. Bu sayede hücresel tedaviler için, en çok hücreyi elde edebileceğimiz ve aynı zamanda tüm MKH özelliklerini koruyan pasaj numarası ve izolasyon yönteminin belirlenmesi hedeflenmiştir. Hücrelerin çoğalma hızları, farklılaşma kapasiteleri, spesifik yüzey belirteçleri, gen ekspresyon profilleri, yara iyileşme kapasiteleri, immün düzenleyici özellikleri karşılaştırılmıştır. Yapılan tüm çalışmaların sonuçlarına göre; 4 farklı hücrenin de tüm MKH özelliklerine sahip olduğu ve klinikte kulanılabileceği görülmüştür. Enzimatik ve eksplant izolasyonla elde edilen hücreler arasında belirgin bir fark görülmemiştir. Her ne kadar erken pasaj kök hücrelerin daha iyi rejeneratif etkiye sahip olduğu bilinse de, P6’ya daha fazla hücre getirilebileceği için bir dokudan çok hücre gereksinimi duyulduğu durumlarda P6 hücrelerinin kullanılabilirliğinin de mümkün olduğu görülmüştür.
Mesenchymal Stem Cells (MSCs) have the ability to differentiate into cells such as bone, cartilage, muscle, fat, nerve, epithelium, etc., as well as self-renewal. The umbilical cord contains a gelatinous connective tissue called Wharton's Jelly (WJ), which is very rich in MSCs. WJ-MSCs have therapeutic properties in both autologous and allogeneic use, their ability to differentiate into three germ layers, their ability to modulate the immune response, their ability to stimulate tissue repair, and their use in regenerative medicine such as cytokine release by accumulating in damaged tissue. Good Manufacturing Practices is a system that ensures that products are produced according to quality standards, and that risks in products are minimized and detected. Within the scope of this thesis, the umbilical cord was delivered to the Good Manufacturing Practices laboratory and the cell production stages including isolation were carried out in these standards. However, this study discusses the phenotypic characteristics, genomic features, and immunomodulatory properties of MSCs isolated from the umbilical cord by two different methods, enzymatic and explant, and brought to different passage numbers (P2 and P6). In this way, it was aimed to determine the passage number and isolation method that we can obtain the most cells for cellular treatments and at the same time preserve all MSC properties. Proliferation rates, differentiation capacities, specific surface markers, gene expression profiles, wound healing capacities, immunomodulatory properties of cells were compared. According to the results of all studies carried out, it was seen that 4 different cells have all the properties of MSC and can be used in the clinic. There was no significant difference between the cells obtained by enzymatic and explant isolation. Although it is known that early passage stem cells have a better regenerative effect, it has been observed that P6 cells can be used in cases where more cells are needed than a tissue, since more cells can be brought to P6.
Mesenchymal Stem Cells (MSCs) have the ability to differentiate into cells such as bone, cartilage, muscle, fat, nerve, epithelium, etc., as well as self-renewal. The umbilical cord contains a gelatinous connective tissue called Wharton's Jelly (WJ), which is very rich in MSCs. WJ-MSCs have therapeutic properties in both autologous and allogeneic use, their ability to differentiate into three germ layers, their ability to modulate the immune response, their ability to stimulate tissue repair, and their use in regenerative medicine such as cytokine release by accumulating in damaged tissue. Good Manufacturing Practices is a system that ensures that products are produced according to quality standards, and that risks in products are minimized and detected. Within the scope of this thesis, the umbilical cord was delivered to the Good Manufacturing Practices laboratory and the cell production stages including isolation were carried out in these standards. However, this study discusses the phenotypic characteristics, genomic features, and immunomodulatory properties of MSCs isolated from the umbilical cord by two different methods, enzymatic and explant, and brought to different passage numbers (P2 and P6). In this way, it was aimed to determine the passage number and isolation method that we can obtain the most cells for cellular treatments and at the same time preserve all MSC properties. Proliferation rates, differentiation capacities, specific surface markers, gene expression profiles, wound healing capacities, immunomodulatory properties of cells were compared. According to the results of all studies carried out, it was seen that 4 different cells have all the properties of MSC and can be used in the clinic. There was no significant difference between the cells obtained by enzymatic and explant isolation. Although it is known that early passage stem cells have a better regenerative effect, it has been observed that P6 cells can be used in cases where more cells are needed than a tissue, since more cells can be brought to P6.
Açıklama
Anahtar Kelimeler
Mezenkimal Kök Hücreler, İyi Üretim Uygulamaları, Göbek Kordonu, Wharton's Jelly, Mesenchymal Stem Cell, Good Manufacturing Practices, Umbilical Cord
Kaynak
WoS Q Değeri
Scopus Q Değeri
Cilt
Sayı
Künye
ERGÜL YÜKSEL, Zehragül. (2021). İyi Üretim Uygulamaları Standartlarında Farklı
Tekniklerle İzole Edilen Göbek Kordonu Kaynaklı Erken ve Geç Pasaj Mezenkimal
Kök Hücrelerin İmmunofenotipik, Genomik ve İmmunsüpresif Özelliklerinin
Karşılaştırılması. İstinye Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Kök Hücre ve Doku
Mühendisliği ABD. Yüksek Lisans Tezi. İstanbul.
